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双向扩散试验

　　双向扩散试验：在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体作出定性分析。双向扩散试验也分为试管法和平板法。

　　1、试管法：在含有抗原的溶液和含有抗体琼脂中间，加一层普通琼脂，让下层抗体和上层抗原向中间自由扩散，在抗原、抗体浓度最适时形成沉淀线。

　　2、平板法：

　　是在琼脂板上相距3～5mm打一对孔，或者梅花孔、双排孔、三角孔等。在相应孔中加入抗原或抗体，待其自由扩散后，抗原、抗体形成可见的沉淀线。根据沉淀线的位置可作如下分析：①抗原、抗体是否存在及其相对含量。一般沉淀线靠近抗原孔，提示抗体量大，沉淀线靠近抗体孔，提示抗原量大。

　　②抗原、抗体相对分子量的分析;抗原或抗体在琼脂内自由扩散，其速度受分子量影响。分子量小者，扩散快，反之较慢。由于慢者扩散圈小，局部浓度较大，形成沉淀线弯向分子量大的一方。如若两者分子量相等，则形成直线。

　　③抗原性质的分析，受检的抗原性质可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分别出现完全融合、部分融合、不融合三种情况;

　　④抗体效价的滴定。抗体效价是抗原、抗体经过自由扩散形成沉淀线，出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价

单向扩散试验

　　单向扩散试验：琼脂内混入抗体，待测抗原从局部向琼脂内自由扩散，如抗原和相应抗体结合，则形成沉淀环。

　　1、试管法：将一定量的抗体混入0.7%琼脂糖溶液中，注入小试管内，上层加抗原溶液使待测抗原在凝胶中自由扩散，在抗原抗体比例恰当位置形成沉淀环。

　　2、平板法：是将抗体或抗血清混入0.9%琼脂糖内，未凝固前倾注成平板，然后在上打孔，将抗原加入孔中，放37℃让其自由扩散，24～48h后可见孔周围出现沉淀环，测定环的直径或面积计算标本中待测抗原的浓度。有两种计算方法：l)Mancini曲线：适用大分子抗原的和长时间扩散(>48h)的结果，沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线性关系c/d2=k.(其中c为抗原浓度d为沉淀环直径k为常数)

　　3、单向扩散试验检测时的注意点：

　　(1)抗血清必须特异性强、效价高、亲和力强，在良好条件下保存。

　　(2)每次测定都必须作标准曲线。

　　(3)每次测定时必须用质控血清作质控。

　　(4)注意双环现象(出现了两种抗原性相同成分)。

　　(5)应用单克隆抗体测量多态性抗原时，测定值偏低;用多克隆抗体测量单克隆病时，测定值偏高。

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