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　　双向扩散试验

　　双向扩散试验是让抗原和抗体双方都在琼脂中各自向对方扩散，在比例恰当之处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体进行定性分析。根据试验形式也可分为试管法和平板法两种。

　　(一)试管法

　　(二)平板法

　　是鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一。根据沉淀线的有无、形态和位置可作如下分析：

　　1.抗原或抗体的存在与否以及相对含量的估计　沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致，沉淀线如果靠近抗原孔，则表示抗体含量较大;沉淀线如果靠近抗体孔，则表示抗原含量较大;不出现沉淀线则表明无对应的抗体或抗原或者抗原过量。

　　2.抗原或抗体相对分子量的分析　抗原或抗体在琼脂内自由扩散，其速度受分子量的影响。分子量小者扩散快，反之则较慢。由于慢者扩散圈小，局部浓度则较大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方;如果两者分子量大致相等，则形成直线。

　　3.抗原性质的分析　两种受检抗原的性质可完全相同、部分相同或完全不同。三种情况在双向扩散试验中表现如下：两条沉淀线互相吻合相连，表明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀，两个抗原相同;沉淀线呈部分相切，说明两个抗原之间有部分相同;两条沉淀线交叉而过，说明两个抗原完全不同。

　　4.抗体效价的滴定　双向扩散试验是抗血清抗体效价滴定的常规方法。固定抗原的浓度，稀释抗体;或者抗原和抗体双方皆作不同的稀释，经过自由扩散，形成沉淀线，以出现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体的效价。

　　5.抗原或抗体纯度鉴定　用混合抗原或抗体鉴定抗体或抗原，出现一条沉淀线说明待测抗原或抗体纯，出现多条沉淀线说明不纯。

　　双向扩散试验简单易行，用途广泛，但该技术灵敏度低，出现结果慢，不能精确定量，这些弱点在相当程度上限制了它的应用。

　　练习题：

　　1.关于双向扩散试验下列错误的是

　　A.平板法是鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一

　　B.不出现沉淀线则表明无对应的抗体或抗原或者抗原过量

　　C.抗原或抗体在琼脂内自由扩散，其速度受分子量的影响

　　D.双向扩散试验是抗血清抗体效价滴定的常规方法

　　E.双向扩散试验简单易行，用途广泛，该技术灵敏度高，出现结果快，能精确定量

　　【答案及解析】E。双向扩散试验简单易行，用途广泛，但该技术灵敏度低，出现结果慢，不能精确定量，这些弱点在相当程度上限制了它的应用。

　　2.双向琼脂扩散试验中，若抗原抗体含量相同，但抗原的分子量比抗体大，则沉淀线应为

　　A.靠近抗原孔，且弧线弯向抗原侧

　　B.靠近抗原孔，且弧线弯向抗体侧

　　C.靠近抗体孔，且弧线弯向抗原侧

　　D.靠近抗体孔，且弧线弯向抗体侧

　　E.居于抗原孔和抗体孔中间，且弧线弯向抗原侧

　　【答案及解析】E。沉淀反应中，沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量大;靠近抗体孔，提示抗原含量多。抗原抗体在琼脂内扩散速度受分子量的影响，分子量小的扩散快。由于速度慢者扩散圈小，局部浓度大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方。

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