初级检验技士考试辅导:瑞氏染色法

　　初级检验技士考试辅导:瑞氏染色法

　　瑞氏染色法是临床上最常用的染色方法。

　　1.瑞氏染料

　　由酸性染料伊红(E-)和碱性染料亚甲蓝(M+)组成。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝，有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红;二是固定细胞形态。

　　2.染色原理

　　既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质、原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色;中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色;完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

　　3.pH的影响 (pH6.4～pH6.8) 

　　细胞各种成分均属蛋白质，因蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色;在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致细胞染色呈色异常，形态难以识别，甚至错误。

　　4.染色方法和注意事项 

　　(1)血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

　　(2)冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。

　　(3)染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

　　(4)瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇(AR级以上)和甘油组成，Ⅱ液为磷酸盐缓冲液(pH6.4～pH6.8)。