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荧光抗体技术

　　(1)荧光抗体的制备和鉴定：

　　①抗体荧光素标记：用于标记抗体，要求是高特异性和高亲和力的。作为标记的荧光素应符合以下要求：

　　1)应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除。

　　2)荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率。

　　3)荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。

　　4)与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。

　　5)标记方法简单、安全无毒。

　　6)与蛋白质的结合稳定，易于保存。常用的标记蛋白质的方法有搅拌法和透析法两种。

　　②荧光抗体的鉴定：包括效价及荧光素与蛋白质的结合比率。抗体效价可以用琼脂双扩散法进行滴定，效价大于1：16者较为理想。荧光素与蛋白质结合比率(F/P)来计算。F/P值越高，说明抗体分子上结合的荧光素越多，反之则越少。一般用于固定标本的荧光抗体以F/P=1.5为宜，用于活细胞染色的以F/P=2.4为宜。

　　(2)免疫荧光显微技术：是使荧光抗体与标本切片中组织或细胞表面的抗原进行反应，洗涤除去游离的荧光抗体后，于荧光显微镜下观察，在黑暗背景上可见明亮的特异荧光。

　　①标本的制作：主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。

　　②荧光抗体染色：滴加经适当稀释的荧光抗体进行染色。

　　③荧光显微镜检查：最好在染色当天即作镜检，以防荧光消退，影响结果。

　　④实验的类型：包括直接法、间接法、补体结合法和双标记法。

免疫效应分子

　　在免疫细胞针对抗原(特别是细胞性抗原)行使免疫效应功能时，细胞因子是其中重要效应分子之一。例如TNFα和TNFβ可直接造成肿瘤细胞的凋零(apoptosis)，使瘤细胞DNA断裂，细胞萎缩死亡;干扰素α、β、γ可干扰各种病毒在细胞内的复制，从而防止病毒扩散;LIF可直接作用于某些髓性白血病细胞，使其分化为单核细胞，丧失恶性增殖特性。另有一些细胞因子通过激活效应细胞而发挥其功能，如IL-2和IL-12刺激NK细胞与TC细胞的杀肿瘤细胞活性。与抗体和补体等其它免疫效应分子相比，细胞因子的免疫效应功能，因而在抗肿瘤、抗细胞内寄生感染、移植排斥等功能中起重要作用。

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