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霍乱弧菌的检验方法

　　1)直接镜检：

　　动力观察：采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴片，观察细菌动力，可见流星或穿梭状动力的细菌。

　　制动试验：取病人“米泔水样”大便标本或6小时蛋白胨水增菌液中发现运动活泼的弧菌，可再做一张涂片，加一滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清(效价1：64)，用暗视野镜观察，3分钟内最初活泼的弧菌被凝集，运动被抑制，即为阳性，则可鉴定。

　　涂片染色：取标本涂片2张，干燥后用乙醇固定，分别用革兰染色及1：10稀释复红染色，镜检有无革兰氏阴性，并成鱼群状排列的弧菌。

　　2)细菌分离培养

　　①直接分离培养：急性期患者米泔水样粪便标本，除增菌外可同时将标本分离培养，常可获得阳性结果。分离用的培养基有强、弱2种选择培养基。弱选择培养基如碱性琼脂和碱性胆盐琼脂，抑制能力弱，粪便中某些杂菌仍可生长。强选择性培养基常用的有庆大霉素琼脂等。现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行分离。

　　②增菌后分离培养：来自带菌者或恢复期患者的标本，因含菌量少必须先增菌后分离。可将标本接种于碱性蛋白胨水内，置35℃增菌6-8小时后分离培养，必要时可做二次增菌后再进行分离培养。

　　3)鉴定：

　　根据霍乱弧菌在各种选择培养基上的特点，挑选可疑菌落进行鉴定。鉴定以血清学(玻片凝集)为主，结合形态学、生化反应作出判断。必要时作其他试验以便与其他细菌进行鉴别。

　　①玻片凝集试验：从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌多价诊断血清(效价1:32-1:64)作玻片凝集试验。立即出现凝集者为阳性，同时设生理盐水和阳性细菌株对照。

　　②形态学检查：取纯培养物涂片革兰氏染色，观察菌体形态及染色性。用悬滴法或半固体穿刺法检测动力。

　　③生化反应：霍乱弧菌氧化酶试验、吲哚试验、粘丝试验和霍乱红试验均阳性。

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