针对外周血细胞检验的注意事项
1.血液标本的采集
血液标本的采集,可分为毛细血管采血法和静脉采血法。DETA-K2抗凝剂对血细胞形态影响很小,因此适用于血细胞计数,特别是血小板计数。血细胞分析仪使用标本一般要求为静脉抗凝血,为了避免淤血和浓缩,压脉带压迫时间不可过长,最好不超过半分钟。因为毛细血管标本,受末梢血循环状态、采血技术的影响,有时血液易形成小凝块,堵塞机器造成实验结果偏差。
2.血细胞分析仪计数
血液标本在室温中必须6h内上机检测,上机前一定要将血液标本颠倒混匀至少8次,如需制备血涂片,应在采血后3h内涂制。无论多先进的血液分析仪,只能当作一种过筛手段,不能完全替代目视法显微镜镜检,因为仪器还不能准确区分幼稚细胞、异常淋巴细胞、有核红细胞等。因此,当出现白细胞、红细胞及血小板明显升高或降低,白细胞分类出现异常结果,白细胞、红细胞及血小板直方图或散点图出现异常,均应用显微镜涂片复查。
3.血涂片的制备
血涂片既可由非抗凝的静脉血和毛细血管血制备,也可由DETA-K2抗凝血制备,EDTA-K2抗凝血中,钙离子被螯合后,能阻止血小板聚集,推片时血小板均匀平均,显微镜下易于对血小板进行观察评价,但有时可观察到因EDTA-K2引起的红细胞皱缩及白细胞丛集现象,因此最好使用非抗凝血制备涂片,这样可减少因抗凝剂所致的人工假象。涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度有关;血膜分布不均,主要是推片边缘不齐,用力不均或载玻片不清洁所致,将制成的血膜在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩。
4.血涂片的染色
瑞氏-姬姆萨混合染色,两种染色法各有其优缺点,故在细胞学检查中常将两者结合起来,取长补短,细胞的胞质、颗粒、核等染色均较满意;染色环境的pH对着色影响很大,应维持在pH值6.4~6.8,因此必须使用缓冲液;未干透血膜不能立即染色,否则染色时易脱落。
5.血涂片的镜检
选择血涂片的体尾交界处染色良好的部分,在油镜下按一定方式有规律地移动视野,一般计数100个~200个白细胞,同时注意白细胞、红细胞、血小板形态的改变和分布,有无血液寄生虫、有核红细胞、幼稚或原始细胞、异淋细胞等。