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单向扩散试验
琼脂内混入抗体,待测抗原从局部向琼脂内自由扩散,如抗原和相应抗体结合,则形成沉淀环。
1、试管法:将一定量的抗体混入0.7%琼脂糖溶液中,注入小试管内,上层加抗原溶液使待测抗原在凝胶中自由扩散,在抗原抗体比例恰当位置形成沉淀环。
2、平板法:是将抗体或抗血清混入0.9%琼脂糖内,未凝固前倾注成平板,然后在上打孔,将抗原加入孔中,放37℃让其自由扩散,24~48h后可见孔周围出现沉淀环,测定环的直径或面积计算标本中待测抗原的浓度。有两种计算方法:l)Mancini曲线:适用大分子抗原的和长时间扩散(>48h)的结果,沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线性关系c/d2=k.(其中c为抗原浓度d为沉淀环直径k为常数)
3、单向扩散试验检测时的注意点:
(1)抗血清必须特异性强、效价高、亲和力强,在良好条件下保存。
(2)每次测定都必须作标准曲线。
(3)每次测定时必须用质控血清作质控。
(4)注意双环现象(出现了两种抗原性相同成分)。
(5)应用单克隆抗体测量多态性抗原时,测定值偏低;用多克隆抗体测量单克隆病时,测定值偏高。
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