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　　瑞氏染色法染液的配制

　　(1) 瑞氏染液配制：

　　瑞氏染料 830gm 或 1g

　　甲醇( AR ) 500ml 或 600ml

　　先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入 一 清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶)，再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。

　　(2) 缓冲液：

　　1) 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使 pH 恒定。

　　2) 缓冲液配制( pH6.4~6.8 ，弱酸性)：

　　配方 1 ： 配方 2 ：

　　1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml

　　1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml

　　H2O( 新鲜 ) 加至 1000ml

　　置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。

　　瑞氏染色法的基本步骤

　　1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min;

　　2. 再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面(滴加量为A液的2-3倍)，以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min.(染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异)

　　3.水洗(冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上)，干燥、镜检。

　　瑞氏染色法操作时的注意事项

　　1. 染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定;通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟;气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。

　　2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。

　　3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。

　　4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。

　　5.染料放置时间越长，染色效果越好。

　　6. 本试剂应由专业人员使用。

　　血细胞染色—吉姆萨染色法

　　吉姆萨(Giemsa)染色法吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

　　PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境里正电荷增多，易和伊红结合，染色为偏红;在偏碱性环境里负电荷增多，易和美蓝或天青结合，染色偏蓝。所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。配制顼特液一定用优质甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。

　　一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良。

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