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游离脂肪酸测定

　　临床上将C10以上的脂肪酸称为游离脂肪酸(FFA)。正常血清中含有油酸(C18：1)占54%，软脂酸(C16：1)占34%，硬脂酸(C18：1)占6%，是其主要的FFA.另外还有月桂酸(C12：0)、肉豆蔻酸(C14：0)和花生四烯酸(C20：1)等含量很少的脂肪酸。与其他脂质比较，FFA在血中浓度很低，其含量水平极易受脂代谢、糖代谢和内分泌功能等因素影响，血中FFA半寿期为1-2min，极短。血清中的FFA是与清蛋白结合进行运输，属于一种极简单的脂蛋白。

　　测定血清FFA法有滴定法、比色法、原子分光光度法、高效液相层极法和酶法等。一般多以酶法测定。作FFA测定的标本一定要注意在4℃条件下分离血清并进行测定。因为血中有各种脂肪酶存在，极易也极快速使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中FFA值上升。贮存的标本仅限于24h内，若保存三天，其值约升高30%，使结果不准确。

　　⒈非酶法确定非酶法测定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相层析法。前三种方法准确性差，高效液相层析法仪器太昂贵，不便于批量操作。

　　⒉酶测定法血清中主要用脂肪酶测定。可分别测定产物乙酰CoA、AMP或辅酶A(CoA)，进行定量。酶法测定结果准确可靠快速，易于批量检测。

免疫扩散法

　　先制备含Apo抗体的琼脂糖凝胶，间隔等距离打孔，加入待测人血清，水平置于温箱(37℃)保温24或48h，抗原从孔中间向周围扩散，因凝胶板中有相应抗体，经一定时间扩散后，最后在凝胶孔周围形成一圆型沉淀圈，测量其圆直径，以圆的面积大小计算血清中Apo含量。该法要求在测量圆周大小时，一定要精确到0.1mm.这一测定方法可适用于以抗体为试剂贩所有微量蛋白的测定，但易受多种因素的影响，难以测准，有淘汰的趋势。

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