免疫扩散法
先制备含Apo抗体的琼脂糖凝胶,间隔等距离打孔,加入待测人血清,水平置于温箱(37℃)保温24或 48h,抗原从孔中间向周围扩散,因凝胶板中有相应抗体,经一定时间扩散后,最后在凝胶孔周围形成一圆型沉淀圈,测量其圆直径,以圆的面积大小计算血清中 Apo含量。
该法要求在测量圆周大小时,一定要精确到0.1mm.这一测定方法可适用于以抗体为试剂贩所有微量蛋白的测定,但易受多种因素的影响,难以测准,有淘汰的趋势。
糖异生
糖异生的主要前体是乳酸、丙酮酸、氨基酸及甘油等。在反刍动物的消化道中,经细菌作用能将大量纤维糖异生素等转变成丙酸,后者在体内也可转变成糖。
过程分两阶段:
①各种糖异生前体(除甘油外)转变成磷酸烯醇式丙酮酸;
②磷酸烯醇式丙酮酸转变为6-磷酸葡萄糖,再生成各种单糖或多糖。从丙酮酸开始合成糖的过程虽然与糖酵解的逆反应类似,但是由于己糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶所催化的三个反应很难逆向进行。
在糖异生作用中,己糖激酶和磷酸果糖激酶催化的两个反应的逆过程分别由葡萄糖-6-磷酸酶和果糖1,6-二磷酸酶催化完成。丙酮酸激酶催化的反应的逆过程,则通过丙酮酸羧化酶催化丙酮酸生成草酰乙酸,再由磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸。糖异生调节饥饿时,体内脂肪及蛋白质分解加强,剧烈运动时肌肉糖酵解加强,均可提供较多的前体加速肝中的糖异生。
肝细胞ATP或乙酰辅酶A(CoA)供应充分时,能加强丙酮酸羧化而成糖
肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素都能增加肝细胞中的糖异生;胰岛素则抑制之。
生理意义:空腹或饥饿时主要靠糖异生维持正常血糖浓度,以满足脑组织等对葡萄糖持续消耗的需要,也充分利用了体内过多的非糖物质如乳酸、戊糖氨基酸等。
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