2010执业药师考试药学专业知识(一)复习要点(11)

　　第六章 色谱法

　　l 色谱法：是一种物理或物理化学分离分析方法，将混合物中各组分分离后在线或离线分析的方法。是分析混合物的最有效的手段。

　　l 应用范围：定性鉴别、纯度检查、含量测定。

　　§1. 概论

　　★★一、基本原理

　　色谱过程是物质分子在相对运动的两相(固定相和流动相)间分配平衡的过程，可用分配系数(K )和容量因子(k)来描述。

　　混合物中，若两组分的 K或 k不等，则被流动相携带的速度不等，产生差速迁移，从而被分离。

　　1. 分配系数K：组分在固定相和流动相之间达到分配平衡时的浓度之比。

　　K = Cs/Cm

　　K：与组分自身特性、固定相、流动相的性质及温度有关

　　2. 容量因子k (质量分配系数)：达分配平衡后，组分在固定相和流动相中的质量之比。

　　k = Ws/Wm

　　k与K的关系： k = Cs·Vs/(Cm·Vm )= K(Vs/Vm)

　　k: 与组分、固定相、流动相的性质及温度有关;还与两相体积有关。

　　不同组分之间的 k 差异是色谱分离的先决条件

　　3. 色谱过程方程 tR=t0(1+K·VS/Vm)=t0(1+k)

　　二、分类：

　　《中国药典》将色谱法分为纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、电泳法

　　1. 按分离原理分类：

　　吸附色谱法：固定相为固体(吸附剂) 如GSC、LSC

　　分配色谱法：固定相为液体 如GLC、LLC

　　离子交换色谱法：固定相为离子交换树脂，适用于离子型的有机物或无机物的分离分析

　　分子排阻色谱法(空间排组色谱法、凝胶色谱法)：固定相为多孔性填料(凝胶)

　　2. 按操作形式分类：柱色谱法、平面色谱法、电泳法

　　§2. 薄层色谱法 thin layer chromatography TLC

　　一、基本原理：

　　分离依据：难被吸附化合物移动快，易被吸附化合物移动慢些，产生差速迁移®KA≠KB®分离

　　二、常用固定相

　　吸附TLC法的固定相为吸附剂，最常用硅胶，其次有硅藻土、氧化铝、微晶纤维素、聚酰胺。

　　1. 硅胶：SiO2·xH2O， 具有硅氧交联结构、表面有许多硅醇基的多孔性微粒。硅醇基是活性基团。含水量↑，活性↓。

　　活化：105℃ ~ 110℃加热30 min，吸附力增强。

　　TLC常用硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254。

　　2. 氧化铝：有碱性、中性和酸性三种

　　3. 聚酰胺：表面有酰胺基，与酚、羧酸、氨基酸等形成氢键

　　三、操作方法 薄层板的制备：涂布厚度0.2～0.3 mm。

　　点样与展开：点样的样点一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径为2～4mm。

　　一块板可以点多个样点，展开时，薄层板浸入展开剂的深度为距薄层底边0.5～1.0cm