2010执业药师考试药学专业知识(一)复习要点(11)

　　荧光薄层板：荧光淬灭法

　　普通薄层板 有色 直接检视;无色 显色检视

　　通用型显色剂：碘、硫酸溶液、荧光黄溶液

　　(四)色谱系统适用性试验

　　目的： 使斑点的检测灵敏度、比移值(Rf)和分离效能符合规定

　　1.检测灵敏度

　　2.比移值(Rf)—— 基本定性参数 ： Rf = l / lo

　　Rf 最佳范围0.3～0.5;可用范围0.2～0.8。

　　3. 分离效能 分离度(R)表示 R=2d /(W1+W2)

　　★四、应用：TLC法主要用于药品的鉴别或杂质检查。

　　(一)鉴别：

　　将同浓度的供试品溶液、对照品溶液点在同一薄层板上¾®展开显色后¾®供试品、对照品颜色与比移值Rf均一致¾®可认为供试品与对照品是同一物质。

　　(1)与对照品比较Rf值 (2)与结构相似的物质比较Rf值

　　(二) 杂质检查

　　1. 杂质对照品法： 杂质斑点颜色与杂质对照品斑点比较，不得更深¾®可认为未超过规定的杂质最高限量。

　　2.自身稀释对照法(高低浓度对比法) 适用于得不到杂质对照品的情况

　　供试品溶液按限度规定稀释成另一低浓度溶液或系列溶液，为对照溶液。供试品杂质斑点与相应的自身稀释对照液所显主斑点比较，颜色不得更深

　　§3. 高效液相色谱法(HPLC)

　　high performance liquid chromatography HPLC

　　★一、基本原理

　　样品中各组分在固定相与流动相之间分配，由于各组分的分配系数不等，他们按分配系数大小的顺序依次被流动相带出色谱柱。K小的组分先流出，K大的组分后流出。

　　(一) 基本概念

　　1.色谱图和色谱峰

　　色谱图或流出曲线：色谱响应信号随时间的变化曲线

　　色谱峰：流出曲线上的突起部分。

　　正常：正态分布曲线;不正常：拖尾峰和前延峰。色谱峰正常与否用拖尾因子衡量。

　　每个组分的色谱峰可用三项参数说明

　　峰高或峰面积：用于定量。 峰宽W：用于衡量柱效

　　峰位：用保留值tR表示，用于定性。

　　2. 基线

　　在色谱分离过程中，没有组分流出时的流出曲线。反映色谱系统(主要是检测器)的噪音水平

　　3. 保留值

　　保留时间( tR )、死时间( t0 )、 调整保留时间(tR ´): tR ´= tR - t0

　　相对保留值(r)：即选择性因子， r2,1= tR2´/ tR1´= k2/k1

　　4. 色谱峰区域宽度 越小，流出组分越集中，有利于分离

　　标准差( )、半高峰宽( Wh/2)、峰宽(W)

　　★★(二) 塔板理论

　　色谱柱踏板数大于103时，流出曲线趋于正态分布。

　　理论踏板高(H)可由柱长(L)和理论踏板数 n 计算：

　　H = L /n n = 5.54 (tR/Wh/2)2

　　记录纸速(mm/min)：转换分子、分母单位相同的参数。联系时间单位与长度单位。

　　H 和 n 都是柱效指标，可用于评价柱效高低。 塔板数越多，塔板高度越小，柱效越高

　　例：用HPLC法测得某组分的保留时间tR为1.5 min，半峰宽Wh/2为0.2 cm;记录纸速为2.0 cm/min，则柱效为：

　　A. 1246

　　B. 2492

　　C. 623

　　D. 1800

　　E. 311

　　n=5.54(tR/ Wh/2)2 =5.54(1.5×2.0/0.2)2 =1246