2014年执业药师《药物分析》考点精析：第六章

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第六章　色谱法

　　色谱的概念与分析特点

　　色谱理论

　　色谱分类

　　色谱仪器基本结构(检测器)

　　色谱分析应用

　　色谱基础知识

　　1.色谱分析特点：高灵敏度、高效能、高选择性、快速度

　　2.色谱峰三参数：峰面积(定量)、峰位(定性)、峰宽(柱效)

　　色谱理论

　　分配系数、容量因子：k=K×(Vs/Vm)=(Cs/Cm)×(Vs/Vm) ;容量因子差异是色谱分离的先决条件;分配系数差异是物质分离的前提。

　　两个理论

　　速率理论：涡流扩散(小粒度均匀颗粒匀浆装柱);传质阻抗(小粒度、低粘度、适当高温);纵向扩散(限气相色谱)

　　塔板理论：n=5.54(tR/Wh/2)2

　　H=L/n

　　色谱分离原理分类

　　吸附色谱：如薄层色谱

　　分配色谱：固定相为液体的液相、气相色谱，最普遍

　　离子交换色谱：离子型物质分离

　　分子排阻色谱：大分子物质可利用分子大小不同而分离

　　薄层色谱

　　原理：利用A、B两种物质的KA≠KB而分离

　　固定相：硅胶(活化、G、H、F254)、硅藻土、氧化铝、纤维素等

　　薄层板制备：1份固定相+3份水，同一方向研磨

　　点样：距底边2.0cm，样点直径2-4mm;

　　检视：显色、荧光

　　色谱系统适用性：灵敏度、比移值、分离度

　　应用

　　鉴别：比较Rf值是否一致

　　杂质检查：杂质对照法、自身稀释对照法

　　高效液相色谱法

　　原理：分配色谱、分子排阻色谱、离子交换…

　　分配色谱分类：

　　反相色谱(流动相极性大于固定相;极性强的先出柱;分离非极性和中等极性有机分子;固定相多为C18(ODS)和C8柱;流动相多为甲醇-水或乙腈-水;最广泛);

　　正相色谱(流动相极性小于固定相;极性弱的先出柱;分离极性和中等极性有机分子)

　　仪器结构

　　高压泵

　　色谱柱(固定相：C18烷基键合硅胶，流动相：甲醇-水或乙腈-水)

　　进样阀

　　检测器

　　浓度型：紫外检测器、光电二极管阵列检测器、荧光检测器、电化学检测器、质谱检测器

　　质量型：蒸发光散射检测器、示差折光检测器

　　色谱系统适用性

　　四参数：理论板数、分离度、重复性和拖尾因子

　　理论板数、分离度(R>1.5)、重复性(RSD≤2.0%)、拖尾因子(0.95-1.05)的计算公式

　　标准色谱分析方法中的固定因素：固定相种类、流动相组成、检测器类型

　　应用

　　1.鉴别：比较tR

　　2.杂质检查

　　内标法(公式)

　　外标法(公式)

　　加校正因子(需有杂质对照品)和不加校正因子主成分自身对照

　　面积归一化

　　3.含量测定

　　内标法

　　外标法

　　气相色谱法

　　原理：分配色谱，分离热稳定蒸汽压大的物质

　　仪器结构

　　气源：氮、氦、氢

　　进样：顶空进样、直接进样

　　色谱柱：填充柱和毛细管柱(开管型(涂壁WCOT或涂层SCOT);填充型);SCOT应用最多;色谱柱用前需老化

　　固定液与载体

　　固定液：烃类(角鲨烷，非极性)、硅氧烷(弱极性，应用最广)、醇类(氢键型，聚乙二醇，药物分析常用)

　　载体：硅藻土、多孔微球

　　检测器：火焰离子化检测器(FID)、电子捕获检测器(ECD，用于含卤素、硫、氧、等电负性强基团)、质谱检测器(MS)、热导检测器(TCD)

　　应用(同液相色谱)

　　内标法

　　外标法

　　标准加入法(消除样本基质的影响)

　　面积归一化法

　　电泳法

　　原理：带电荷物质在电场下趟度差异而分离

　　影响因素：pH值和离子强度(缓冲液)、电场强度、样品浓度1%

　　类型：平板电泳、毛细管电泳

　　应用

　　鉴别：肝素钠乳膏鉴别：琼脂糖凝胶电泳

　　分子量测定：注射用重组人促红素:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

　　纯度检查：冻干人血白蛋白纯度：醋酸纤维素薄膜电泳;肉毒抗毒素纯度：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

　　等电点测定：注射用重组人白介素-2等电点：等电聚胶电泳

　　分子组分比测定：尿激酶分子组分比：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

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