2009年执业药师考试辅导：黄酮类化合物提取分离

　　二、分离方法

　　分离的基本依据：

　　极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。

　　(一)柱色谱法

　　1、硅胶柱色谱法

　　适于分离异黄酮，二氢黄酮(醇)和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。

　　分离苷元时：氯仿-甲醇混合溶剂洗脱。

　　分离苷时：氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水

　　2、聚酰胺柱色谱

　　适于黄酮类化合物的分离。

　　规律：

　　A：苷元相同时，以含水移动相洗脱，被吸附的强弱顺序为： 苷元>单糖苷>双糖苷>双糖键苷。

　　B：与酚羟基的数目有关，数目越多，吸附力越强。与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易形成分子内氢键，则吸附力减弱。

　　查耳酮>二氢黄酮， 黄酮>二氢黄酮

　　C：不同类型黄酮类化合物，被吸附的强弱顺序为：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮>异黄酮。

　　D：分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力越强。

　　3、葡聚糖凝胶色谱法

　　凝胶类型：Ssephadex LH-20和Sephadex G两种类型的凝胶。

　　分离苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，则吸附力越强，越难洗脱。

　　分离苷时：主要靠分子筛，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。

　　黄酮类化合物 取代基 Ve/Vo

　　芹菜素 5，7，4‘-三羟基 5.3

　　木犀草素 5，7，3‘，4’-四羟基 6.3

　　槲皮素 3，5，7，3'，4'-五羟基 8.3

　　杨梅素 3，5，7，3‘，4’，5‘-六羟基 9.2

　　山柰酚-3-鼠李糖基 三糖苷 3.3

　　半乳糖-7-鼠李糖苷

　　槲皮素-3-芸香糖苷 双糖苷 4.0

　　槲皮素-3-鼠李糖苷 单糖苷 4.9

　　常用的洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液、醇及含水醇

　　(二)PH梯度法：用不同浓度的碱分离

　　(三)硼酸络合法 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物可与硼酸络合生成易溶于 水的化合物。