2013年执业中药师中药化学辅导讲义第二章

　　第二章 中药化学成分的一般研究方法

　　1、 各类化学成分的主要生物合成途径

　　乙酸—丙二酸途径(AA-MA)：合成脂肪酸类、酚类、醌类

　　甲戊二羟酸途径(MVA)：合成萜类、甾类

　　莽草酸途径(桂皮酸途径)：具有C6-C3及C6-C1基本结构的化合物

　　氨基酸途径：生物碱

　　复合途径

　　2、 中药有效成分的提取方法

　　(1)溶剂提取法

　　溶剂的选择：相似相溶，最大限度提取所需化学成分，沸点适中易回收，低毒安全。

　　作用原理：溶剂穿透入药材粉末的细胞膜，溶解溶质，形成细胞内外溶质浓度差，将溶质渗出细胞膜。

　　溶剂：亲脂性、亲水性、水

　　极性：石油醚〈 四氯化碳〈 苯〈 二氯甲烷〈 氯仿〈 乙醚〈 乙酸乙酯〈 正丁醇〈 丙酮〈乙醇〈 甲醇〈 水〈酸水

　　提取方法：煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流提取法、连续回流提取法

　　(2)水蒸气蒸馏法：用于提取能随水蒸气蒸馏，而不被破坏的难溶于水的挥发性成分

　　(3)超临界流体萃取法

　　(4)其他方法：升华法、组织破碎提取法、压榨法、超声波提取、微波提取

　　3、 中药有效成分的分离精制方法

　　溶剂法：酸碱溶剂法(酸碱性的不同)

　　溶剂分配法(分配系数不同)：分离极性大的—正丁醇-水

　　极性中等的—乙酸乙酯-水 极性小的—氯仿(乙醚)-水

　　沉淀法(可逆)：专属试剂沉淀法、分级沉淀法、盐析法

　　分馏法(液体沸点不同)：常压蒸馏、减压蒸馏、分子蒸馏

　　膜分离法(高分子膜)(外加压力或化学位差)

　　升华法:小分子生物碱、香豆素

　　结晶法：化合物由非晶形经过结晶操作形成有晶形的过程称为结晶。

　　选择适宜的结晶溶剂：对被溶解成分的溶解度随温度不同应有显著差别， 与被结晶的成分不产生化学反应，沸点适中。

　　色谱分离法：

　　(1)吸附色谱(吸附剂对被分离化合物分子吸附能力)

　　吸附剂：硅胶、氧化铝、活性炭、聚酰胺

　　硅胶—用于分离极性相对较小的成分

　　氧化铝—用于分离碱性或中性亲脂性成分(生物碱、甾、萜)

　　活性炭—用于分离水溶性物质(氨基酸、糖、苷)

　　聚酰胺(氢键)―用于分离酚类、醌类(黄酮类、蒽醌类、鞣质)

　　a 硅胶、氧化铝为极性吸附剂，溶质极性大，吸附力强;溶剂极性大，洗脱力强

　　b 活性炭为非极性吸附剂

　　(2)凝胶过滤色谱(分子筛原理)：葡聚糖凝胶SephadexG亲水性、羟丙基葡聚糖凝胶亲水性亲脂性

　　(3)离子交换色谱(混合物中各成分解离度)：离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶。解离度大难洗脱。主要用于分离纯化蛋白质、多糖、生物碱和其他水溶性成分。

　　(4)大孔树脂色谱(物理吸附)：被分离物质极性越大，RF值越大。极性小的溶剂洗脱能力强。在水中吸附性强。

　　(5)分配色谱(分配系数)：正相：流动相的极性小于固定相极性(分离极性及中等极性的物质)，固定相为氰基与氨基固定相，流动相：氯仿-甲醇

　　反相：流动相的极性大于固定相极性(分离非极性及中等极性物质)固定相：十八烷基硅烷(ODS)、C8键合相，流动相：甲醇-水、乙睛-水

　　4、中药有效成分的理化鉴定

　　(1)物理常数的测定：熔点(溶距0.5-1.0℃)、沸点(沸程不超过5℃)、比旋度、折光率、比重

　　(2)分子式的确定

　　(3)化合物的结构骨架与官能团的确定

　　5、中药有效成分的波谱测定

　　(1)IR：功能基的确认、芳环取代类型的判断

　　(2)UV：判断共轭体系中取代基的位置、种类、数目

　　(3)氢核磁共振(化学位移、偶合常数、质子数)：质子类型、氢分布、核间关系。双照射技术NOE：核增益效应

　　碳核磁共振：质子类型、碳分布、核间关系、弛豫时间

　　二维核磁共振：化学结构间不同位置H之间的关系

　　①同核化学位移相关谱 H- H COSY氢-氢化学位移相关谱：确定质子化学位移和质子之间的偶合关系、连接顺序

　　② H检测的异核化学位移相关谱

　　HMQC( H核检测的异核多量子相关谱)：反映 H核和与其直接相连的 C的关联关系，以确定C-H偶合关系

　　HMBC( H核检测的异核多键相关谱)：碳链骨架的连接信息、有关季碳的结构信息及因杂原子存在而被切断的偶合系统之间的结构信息

　　(4)MS：确定化合物分子量、元素组成以及由裂解碎片检测官能团、辨认化学合物类型、推导碳骨架

　　电子轰击(EI-MS)、化学电离(CI-MS)、场解吸(FD-MS)、快原子轰击(FAB-MS)、电喷雾电离(ESI-MS)、液体二次离子(LSI-MS)、基质辅助激光解吸电离(MALDI-MS)、串联(MS-MS)

　　(5)旋光光谱(ORD)和圆二色光谱(CD)：化合物的构型和构象、确定某些官能团在手性分子中的位置

　　旋光光谱①平坦谱线：没有发色团的光学活性物质，其旋光谱是平坦的，没有峰和谷。比旋光度向短波处升高的谱线是正性谱线，向短波处降低的是负性谱线。

　　②Cotton谱线：化学物分子手性中心邻近有发色团，在发色团吸收波长区域附近，旋光度发生显著变化，产生峰和谷的现象称为Cotton效应。波长短波方向为谷，长波方向为峰——正性效应。

　　圆二色谱：旋光性化合物对组成平面偏振光的左旋圆偏振光和右旋圆偏振光的摩尔吸光系数是不同的现象——圆二色性

　　(6)X射线衍射法(XRD)：测定化合物分子结构(键长、键角、构象、绝对构型)