2014《中药学专业知识二》中药鉴定学：强心苷

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　　强心苷的提取分离

　　(一)提取

　　提取原生苷，首先要注意抑制酶的活性，防止酶解，提取时避免酸碱的影响。提取次生苷，可利用酶解或酸水解的方法，提高目标提取物的产量。

　　常用甲醇或70~80%的乙醇作溶剂。原料含脂类杂质较多时，可先用石油醚或溶剂汽油脱脂;原料含叶绿素较多时，可用稀碱液皂化法，静置析胶法，活性炭吸附法除去叶绿素。

　　(二)分离

　　强心苷浓缩液，可用氯仿和不同比例的氯仿-甲醇(乙醇)溶液依次萃取，将强心苷按极性大小分为几部分，再采用溶剂萃取法、逆流分溶法和色谱分离法分离。分离亲脂性单糖苷、次苷和苷元，一般选用吸附色谱，常以硅胶和氧化铝为吸附剂。

　　强心苷水解反应

　　化学方法主要有酸水解，碱水解;生物方法有酶水解。

　　1.酸水解：

　　·温和酸水解：对苷元影响小，不致引起脱水反应，对不稳定的α-去氧糖亦不致分解，故常得到双糖和叁糖。此法不适用于16位有甲酰基的洋地黄强心苷类。

　　·强烈酸水解：增加作用时间或同时加压才能得到一定量葡糖，但易得到缩水苷元。

　　·氯化氢丙酮法：此法适用于多数Ⅱ型强心苷水解，得到原生苷元和糖衍生物。

　　2.酶水解：能水解除去分子中的葡萄糖而保留α-去氧糖。

　　3.碱水解：碱试剂可使强心苷分子中的酰基水解，内酯环裂开、△20(22)转位及苷元异构化等。

　　·酰基水解：水解脱去强心苷中酰基。

　　·内酯环的水解：水溶液中，NaOH或KOH可使内酯环开裂，酸化后又闭环;醇溶液中，NaOH或KOH使内酯环开环并异构化，酸化后亦不可逆。

　　强心苷·颜色反应

　　根据颜色反应发生在分子的不同部位可以分为以下数种：

　　作用于甾体母核的反应 一般在无水条件下经酸作用，能产生各种颜色反应。常见有：

　　乙酐浓硫酸(Liebermann-Burchard)反应：取样品溶于冰乙酸，加浓硫酸-乙酐(1∶20)数滴→红→紫→蓝→绿→污绿等变化，最后褪色。

　　Salkowski反应：将样品溶于氯仿，加浓硫酸静置，;硫酸层呈血红色或蓝色，氯仿层有绿色荧光。

　　Tschugaev反应：取样品溶于冰乙酸，加几粒氯化锌及乙酰氯共热，或取样品溶于氯仿，加冰乙酸、乙酰氯和氯化锌煮沸，反应液呈紫红→蓝→绿的变化。

　　Rosen-Heimer反应：将样品溶液点在滤纸上，喷25%三氯乙酸乙醇溶液，加热至60℃呈红色至紫色。

　　Kahlenberg反应：将样品溶液点在滤纸上，喷20%五氯化锑的氯仿溶液(不含乙醇和水)，于60~70℃加热3～5min即可显灰蓝、蓝、灰紫等颜色。

　　作用于α、β不饱和内酯环的反应 可用于区别甲、乙型强心苷。甲型强心苷在碱性醇溶液中，能与下列活性亚甲基试剂作用而显色，乙型强心苷无此类反应。

　　Legal(亚硝酰铁氰化钠)反应：取样品1～2mg，溶在2～3滴吡啶中，加1滴3%亚硝酰铁氰化钠溶液和1滴2mol/L的氢氧化钠溶液，反应液呈深红色并渐渐褪去。

　　Raymond(间二硝基苯)反应)：取样品约1mg，以少量50%乙醇溶解后加1%间二硝基苯乙醇溶液0.1ml，摇匀后再加20%NaOH溶液0.2ml →紫红色。

　　Kedde(3，5-二硝基苯甲酸)反应)：取样品的醇溶液于试管中，加3，5-二硝基苯甲酸试剂3～4滴 →红色或紫红色。

　　Baljet(碱性苦味酸试剂)反应)：取样品的醇溶液于试管中，加入碱性苦味酸试剂数滴 →橙色或橙红色。

　　以上反应均呈红或紫红、橙红色。

　　作用于α-去氧糖的反应

　　Keller-Kiliani(K-K)反应 乙酸层显蓝色…此反应是α-去氧糖的特征反应，对游离的α-去氧糖或α-去氧糖与苷元连结的苷都能呈色。

　　占吨氢醇反应 取样品少许，加占吨氢醇试剂1ml，置沸水浴中3min，只要分子中有α-去氧糖都能呈红色。本反应非常灵敏，可用于定量。

　　对-二甲氨基苯甲醛反应 将样品的醇溶液点在滤纸上，喷对-二甲氨基苯甲醛试剂，于90℃加热30s，分子中含α-去氧糖的强心苷可显灰红色斑点。

　　过碘酸-对硝基苯胺反应 取样品的醇溶液点在滤纸上，先喷过NaIO3水溶液，于室温放置10min，再喷对硝基苯胺试液，则迅速在灰黄色背底上出现深黄色斑点，置紫外光下观察则为棕色背底上现黄色荧光斑点。如再喷以5%NaOH甲醇溶液，则色点转为绿色。

　　强心苷波谱分析

　　强心苷元的UV光谱

　　具有△αβ五元内酯环的强心苷元即甲型强心苷元在217～220nm(logε4.20-4.24)处呈现最大吸收。

　　具有△αβ，δ六元内酯环的强心苷元即乙型强心苷元在295～300nm (logε约3.93)处有特征吸收。

　　强心苷元的IR光谱

　　△αβ五元不饱和内酯环的γC=O峰为特征吸收峰，一般在1800～1700cm-1处有两个强吸收峰，其中在低波数的为正常的吸收峰，在高波数的为非正常的吸收峰。

　　△αβ，γδ六元内酯环的强心苷元的C=O红外吸收峰与五元内酯环相同，也有两个吸收峰，但由于环内共轭程度增高，导致两个吸收峰向低波数位移。

　　NMR谱

　　1H-NMR光谱：可用来判断甲基、醛基、羟甲基等上的质子特征，具体信号特征如下：

　　1.△αβ-γ-内酯环：C22-H在δ6.00～5.60内，呈宽的单峰，C21-2H在δ5.00～4.50ppm内，呈AB型四重峰，J=18Hz，或宽单峰或三重峰。

　　2.C10和C13上的甲基在δ1.00ppm左右均为单峰。

　　3.C10上连结的醛基在δ10.0～9.50ppm内为单峰。

　　4.C10上连结的羟甲基乙酰化后，在δ4.50～4.00ppm内呈AB型四重峰，J=12Hz。

　　5.C16位上无含氧取代时，该位上的二个质子在δ2.50～2.00ppm内呈m峰，C17-H在δ2.80ppm左右，为m峰或dd峰，J=9.5Hz。

　　6.C3-H为m峰，在苷元中约在δ3.90ppm，成苷后向低场位移。

　　7.糖部分除常见的糖外还有一些特殊的糖，均有一些特征信号可以识别。

　　13C-NMR光谱： 对研究强心苷结构也十分有用，此外还有下列用途：

　　1. 根据13C-NMR可以用来判断甾体A/B环的构象。

　　2. C3-OH的构型也可用13C-NMR来判断。

　　3. 可以确定强心苷分子中各糖基连接顺序。

　　4. 可以判断强心苷中糖基之间的连接位置。

　　MS谱

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