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霍乱化学检验方法介绍

　　(一)血液检查

　　红细胞和血红蛋白增高，白细胞计数10～20×109/L(1万～2万/mm3)或更高，中性粒细胞及大单核细胞增多。血清钾、钠、氯化物和碳酸盐降低，血pH下降，尿素氮增加。治疗前由于细胞内钾离子外移，血清钾可在正常范围内，当酸中毒纠正后，钾离子移入细胞内而出现低钾血症。

　　(二)尿检查

　　少数病人尿中可有蛋白、红白细胞及管型。

　　(三)病原菌检查

　　1.常规镜检

　　可见粘液和少许红、白细胞。

　　2.涂片染色

　　取粪便或早期培养物涂片作革兰染色镜检，可见革兰阴性稍弯曲的弧菌。

　　3.悬滴检查

　　将新鲜粪便作悬滴或暗视野显微镜检，可见运动活泼呈穿梭状的弧菌。

　　4.制动试验

　　取急性期病人的水样粪便或碱性胨水增菌培养6小时左右的表层生长物，先作暗视野显微镜检，观察动力。如有穿梭样运动物时，则加入01群多价血清一滴，若是群霍乱弧菌，由于抗原抗体作用，则凝集成块，弧菌运动即停止。如加01群血清后，不能制止运动，应再用0139血清重作试验。

　　5.增菌培养

　　所有怀疑霍乱患者粪便，除作显微镜检外，均应作增菌培养。粪便留取应在使用抗菌药物之前，且应尽快送到实验室作培养。增菌培养基一般用pH8.4的碱性蛋白胨水，36～37℃培养6～8小时后表面能形成菌膜。此时应进一步作分离培养，并进行动力观察和制动试验，这将有助于提高检出率和早期诊断。

　　6.分离培养

　　常用庆大霉素琼脂平皿或碱性琼脂平板。前者为强选择性培养基，36～37℃培养8～10小时霍乱弧菌即可长成小菌落。后者则需培养10～20小时。选择可疑或典型菌落，应用霍乱弧菌“0”抗原的抗血清作玻片凝集试验，若阳性即可出报告。近年来国外亦有应用霍乱毒素基因的DNA探针，作菌落杂交，可迅速鉴定出产毒01群霍乱弧菌。

　　7.PCR检测

　　新近国外应用PCR技术来快速诊断霍乱。其中通过识别PCR产物中的霍乱弧菌毒素基因亚单位CtxA和毒素协同菌毛基因(TcpA)来区别霍乱菌株和非霍乱弧菌。然后根据TcpA基因的不同DNA序列来区别古典生物型和埃尔托生物型霍乱弧菌。4小时内可获结果，据称能检出每ml碱性蛋白胨水中10条以下霍乱弧菌。

　　8.鉴别试验

　　古典生物型、埃尔托生物型和0139型霍乱弧菌的鉴别。

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