2013医学检验辅导：HLA血清学定型试验

　　HLA-A、B、C、DR或DQ位点的抗原可用血清方法进行检测，所以称为SD抗原(serologicallydefinedantigen)，其检测方法目前普遍采用补体依赖的细胞毒(complementdependentcytotoxicyty，CDC)试验。

　　1.试验方法美国国家卫生研究院(NIH)的标准方法如下：将一系列已知特异性的标准分型血清(1μl/孔)按设计好的方案加到72孔或60孔专用反应板中(如暂时不用可以冰冻保存);加入待检淋巴细胞2000个/1μl/孔，置室温30min让抗体与抗原结合;加入补体(多为家兔混合血清)5μl，置室温60min;每孔加入5%伊红2～3μl，使死细胞着色;3～5min后每孔加12%福尔马林8μl固定细胞;待细胞全部沉淀后用相差显微镜或倒置显微镜观察结果。某孔的着色细胞超过50个即为阳性反应，说明被检细胞的HLA型与该孔所加抗体的相一致;否则为不一致。

　　2.细胞分离检测活体可取外周血直接分离;检测尸体时取淋巴结，制成单个细胞并洗涤后再分离。检测HLAⅠ类抗原时取单个核细胞层的细胞即可应用，因为该层细胞都表达Ⅰ类抗原;但检测HLA-DR和DQ等Ⅱ类抗原时，就需要进一步分离较纯的B细胞(纯度达80%以上)，因为Ⅱ类抗原不分布在T细胞上。

　　3.分型血清试验用的标准抗血清必须从经产妇(尤其多产妇)的血清中筛选，胎盘液或其他体液也可应用;也可通过人工免疫献血员的方法得到。筛选的方法也用CDC试验，只是将已知与待检互换。Ⅱ类抗血清筛选后还必须用混合血小板将其中可能含有的Ⅰ类抗体吸收去，因试验用的B细胞上也有Ⅰ类抗原。许多人尝试过抗HLA的单克隆抗体，但是多不成功，因鼠源性抗体主要是针对人类的公共抗原而非某个体的HLA私有抗原;还有一个原因是鼠源性抗体多不能固定补体，不能用细胞毒方法进行检测。

　　4.HLA定型板某些专门实验室将HLA定型血清预先加到专用的反应板上冰冻保存，可供自己或出售给他人使用，试验时只须加入待检细胞及其它试剂即可。定型板中抗血清的种类要覆盖本民族或本地区80%以上的抗原，其中高频抗原每种抗血清3份以上，低频抗原每种抗血清2份以上。定型血清板须经几个实验室认可或有关部门核准后才能销售和使用;现在国内所做的定型板多限于HLAⅠ类抗原的检测。