1、样本采集时间若对同一病人作多次测定最好每次在同一时间收集标本,便于比较,以减少人体内各分析物昼夜变化的影响。昼夜变化有内在因素(主要取决于人是在活动还是在睡眠状态),以及外来因素(如饮食、体育活动或其他和某一特定时间有关的活动)。
血样标本采集理想的时间是早晨7:00到8:00,尤其在目的为监测时,最后一次食物和液体摄入应在前一天下午6:00到7:00;对于某些试验要有特殊的说明。如做糖耐量试验或餐后两小时血糖的病人,一定要详细告诉病人何时抽血等事宜。
2、采样系统的使用长期以来,我国临床生化采血没有统一的器材,有的使用经反复洗涤的玻璃试管,有的使用一次性塑料试管,使用中存在不少问题,如试管洗涤不干净造成溶血或残存物质对测定的干扰;软质塑料试管采血,血液自然凝固析出血清时间长,容易造成血清中被检成分的改变,如葡萄糖酵解、酶活性降低、细胞中钾离子外溢等。
血样标本最好采用真空采血系统,这是保证质量的重要措施之一。目前推广使用真空采血系统可有效避免用错抗凝剂,保证了血与抗凝剂比例,解决了交叉污染,防止标本溶血,加分离胶还可加速血清分离等有效措施。真空采血系统采集血液后,应轻轻颠倒混匀5~10次,以确保抗凝剂和促凝剂(分离胶)发挥作用。
3、正确使用抗凝剂 目前常用的抗凝剂有肝素、EDTA盐和枸橼酸盐,实验室应正确使用相应的抗凝剂,且标本采集时应注意血液与抗凝剂的比例。
(1)肝素:通常用肝素锂,浓度为14.3IU/mL血,用量范围为12~30IU/mL,常用于血粘度测定,血气酸碱分析及酶学检查。
(2)EDTA盐:通常用EDTA-K2,浓度为1.5~2.0mg/dl,常用于全血细胞计数及血粘度测定。
(3)枸橼酸盐:通常用枸橼酸钠,浓度为109mmol/L或3.8%,主要用于凝血试验(抗凝剂与血液1:9混合,过高或过低,均可影响PT、APTT的结果),RBC沉降率试验(抗凝剂与血液1:4混匀)。
4、标本的运送血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室,尽快检验,减少标本的放置时间,因为细胞的代谢、光学、化学反应、微生物分解及其蛋白质酶的裂解都将对生化检测结果产生影响。
目前,多数医院住院病人的血液标本都是由夜班护士完成采血,由于工作的特殊性,任务重、时间紧,大多数护士采集时间在早晨5~6点,而检验时间在上午9~10点开始,这样无疑就耽搁了四五个小时。血标本的化学成分在放置后可有某些变化。
如标本放置时间过久,可由于糖酵解而导致血糖下降;有些物质可以通过红细胞膜或由于红细胞的破坏而进入血浆,如红细胞内钾、乳酸脱氢酶、转氨酶、碱性磷酸酶等;血浆中无机磷可由红细胞内有机磷酸酯水解而增加,因此测无机磷时应及分离血清;有些不稳定的酶放置后易失活,如酸性磷酸酶等。因此,常规生化标本采集后应由专人及时收取或送检,急诊标本随留随送。采集后的标本放置时间越短,结果的变异就越小。
如标本确实不能及时检测,必须贮存时应:
(1)防止蒸发:血标本应贮存在密闭的容器中,即使贮存在冰箱内,蒸发的危险性依然存在。
(2)血标本贮存的温度越低,血样保存时间越长。但是特殊指标如血液形态学指标除外。
(3)血样保存应竖立放置以加快凝血。
(4)避免晃动血样,以免产生溶血。
(5)贮存时注意避光,尽量隔绝空气。
(6)血样深冷冻再溶解后,应重复混匀数次,以防检测物质分布不均。
全血采取后应尽快自然地使血清(浆)从与血细胞接触的全血中分离出来。一般应于采血后2小时内分离出血清或血浆,以防止血细胞内外多种成分发生变化。血清标本离心前一般要先自行凝集,所等的时间包括凝血和血块收缩时间,通常这个过程大致要30分钟,加促凝剂时凝集可加快,切勿用竹签剥离凝血块,因人为剥离会诱导溶血。
血浆标本的最大优点在于及时检测,而不需要等到血液凝固后检测,而且可以避免血液凝固引起的轻度溶血所导致的错误,血浆标本还可避免血凝过程中RBC释放钾离子和酶,使得钾离子和部分酶增高,另一方面血清标本由于缺乏纤维蛋白原,而使血清总蛋白较低。
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